Elimination du glycérol de la semence décongelée de coq par centrifugation dans un gel colloïdal synthétique - ANR - Agence nationale de la recherche Accéder directement au contenu
Communication Dans Un Congrès Année : 2022

Elimination du glycérol de la semence décongelée de coq par centrifugation dans un gel colloïdal synthétique

Résumé

Sperm cryopreservation is a crucial method not only to conserve the biodiversity of species and breeds, but also to restore animal populations during emergent epidemics. Currently, glycerol is the most widely used cryoprotectant to freeze chicken sperm due to its effectiveness for maintaining sperm functions, but it is associated with a reduction of fertility or a total infertility during insemination. Therefore, we tried to develop a simple method to remove glycerol from frozen-thawed chicken semen with a centrifugation in a synthetic colloidal gel, the Percoll®. After collecting, chicken semen was frozen in a diluent of 11% glycerol in straws with a programmable freezer. Thawed semen was layered on the solution containing 200 mM sucrose and Percoll® (Solution Sucrose-Percoll®, SSP) in PBS and centrifuged 15 min after. Different concentrations of SSP (40, 50, 60 or 70%) combined with two different temperatures (4 or 20°C) were tested to determine the best conditions of SSP centrifugation. Glycerol concentration and sperm individual motility were evaluated respectively by Glycerol Assay kit and Computer-Assisted Sperm Analysis system (CASA). Our results showed that all concentrations of SSP efficiently reduce glycerol concentration to less than 120 mM (equal to remove 94% of glycerol from thawed semen). Centrifugation at 20°C allowed an efficient selection for motile and progressive sperm especially with SSP 40 and 70%. It indicated that our novel method can efficiently remove glycerol from post-thaw chicken semen with a positive selection of motile sperm. Compared to the conventional method of serial dilutions, it can save 44% of time of glycerol removal process.
La cryoconservation des spermatozoïdes est une méthode cruciale dans la conservation de la biodiversité des espèces et des races, mais aussi pour assurer la restauration des lignées lors de catastrophes sanitaires. Actuellement, le glycérol est l’agent cryoprotecteur le plus utilisé pour la cryoconservation des spermatozoïdes de coq, étant le plus efficace dans le maintien des fonctions du spermatozoïde, mais il est associé à un taux de réussite faible voir une totale stérilité lors de l’insémination. Par conséquent, nous cherchons à développer une méthode simple d’élimination du glycérol par centrifugation dans un gel colloïdal synthétique, le Percoll®. Après collecte, la semence de coqs a été congelée en glycérol 11% en paillettes avec un congélateur programmable. Lors de la décongélation, la semence a été déposée sur une solution de sucrose (200 mM) en présence de Percoll® (Solution Sucrose-Percoll®, SSP) dans du PBS puis centrifugée 15 min. Afin de définir les meilleures conditions, différentes concentrations de SSP (40, 50, 60 ou 70%) ainsi que deux températures (4 ou 20°C) ont été testées. La concentration de glycérol et la mobilité individuelle des spermatozoïdes ont été évaluées après centrifugation respectivement par le kit Glycerol Assay et par Computer-Assisted Sperm Analysis system (CASA). Nos données montrent que toutes les concentrations de SSP réduisent la présence de glycérol à moins de 120 mM (soit une élimination de 94% du glycérol initial). La centrifugation à 20°C permet une bonne sélection des spermatozoïdes mobiles et progressifs, en particulier pour SSP 40 et 70%. Notre nouvelle méthode permet donc d’éliminer efficacement le glycérol des semences de coq cryopréservées tout en sélectionnant les spermatozoïdes présentant une bonne mobilité. Comparée à la méthode conventionnelle de dilutions successives, elle permet de gagner 44% de temps de traitement des échantillons lors de l’élimination du glycérol.
Fichier non déposé

Dates et versions

hal-03760292 , version 1 (25-08-2022)

Identifiants

  • HAL Id : hal-03760292 , version 1

Citer

Hsiu-Lien Lin, Isabelle Grasseau, Pascal Mermillod, Elisabeth Blesbois, Anais Vitorino Carvalho. Elimination du glycérol de la semence décongelée de coq par centrifugation dans un gel colloïdal synthétique. 14. Journées de la Recherche Avicole et Palmipèdes à Foie Gras, Mar 2022, Tours, France. ⟨hal-03760292⟩
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